核酸變性預(yù)制膠在分離片段DNA分子時(shí)效果很好，分辨率很高，甚至相差1bp的DNA的片段都能分開(kāi)，一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)樣孔中可以容納相對(duì)大量的DNA。所以常被用于蛋白印跡實(shí)驗(yàn)、遺傳圖譜構(gòu)建、數(shù)量形狀基因定位、標(biāo)記輔助選擇等生物多樣性研究等。
核酸變性預(yù)制膠的操作步驟：
一、非變性預(yù)制膠：
1、準(zhǔn)備樣品：將樣品和loadingbuffer（5×）按照4：1混合均勻。
2、準(zhǔn)備1×runningbuffer：取200ml的5×TBEbuffer，加入去離子水至1L，制備成1×TBEbuffer。
3、將預(yù)制膠裝入兼容的電泳槽中，加入電泳緩沖液，再緩慢地將梳子拔出。
4、上樣：在梳孔內(nèi)加入適當(dāng)濃度和體積的DNA樣品。
5、電泳條件：150V,50~75min（電泳時(shí)間取決于凝膠濃度）
6、電泳結(jié)束，取出凝膠。
二、尿素變性預(yù)制膠：
1、準(zhǔn)備樣品：將樣品和UREA-TBEloadingbuffer（5×）按照4：1混合均勻,100℃下加熱3-5min。
2、準(zhǔn)備1×runningbuffer：取200ml的5×TBEbuffer，加入去離子水至1L，制備成1×TBEbuffer。
3、將核酸變性預(yù)制膠裝入兼容的電泳槽中，加入電泳緩沖液，再緩慢地將梳子拔出。
4、上樣：用1×TBEbuffer反復(fù)沖洗梳孔以清除梳孔內(nèi)的尿素，在梳孔內(nèi)加入適當(dāng)濃度和體積的DNA樣品。
5、電泳條件：150V,50~75min（電泳時(shí)間取決于凝膠濃度）
6、電泳結(jié)束，取出凝膠。
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