6-磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH）活性檢測試劑盒說明書
微量法
貨號:BC0265
規(guī)格:100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：用時每支加250 μL雙蒸水充分溶解備用；

2. 試劑三：用時每支加250 μL雙蒸水充分溶解備用。

3. 工作液配制：臨用前將試劑一、試劑二、試劑三以15：0.2：0.2比例混合。

產(chǎn)品說明：
G6PDH（EC 1.1.1.49）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，是磷酸戊糖途徑的關鍵酶，催化6-磷酸葡萄糖氧化為6-磷酸葡萄糖酸內(nèi)酯，同時將NADP⁺還原為NADPH，供生物合成及維持細胞內(nèi)的還原狀態(tài)用。因此6-磷酸葡萄糖脫氫酶活性的高低可以從一定程度上反映出生物體的生物合成和抗氧化能力。
G6PDH催化NADP⁺還原生成NADPH，在340nm下測定NADPH增加速率。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件

注意事項：

1. 實驗時，樣本在冰上放置，以免變性和失活。試劑一37℃水浴放置。

2. 比色皿中反應液的溫度必須保持37℃，取小燒杯一只裝入一定量的37℃蒸餾水，將此燒杯放入37℃水浴鍋中。在反應過程中把比色皿連同反應液放在此燒杯中。

3. 最好兩個人同時做此實驗，一個人比色，一個人計時，以保證實驗結(jié)果的準確性。

4. 若樣本測定初始值（0s）大于0.5而ΔA測定小于0.1，可將樣本稀釋后再行測定。

5. 使用96孔板測定時，因是根據(jù)反應速率計算酶活，為保證每個樣本的反應時間盡量一致不推薦同時測過多樣本。

實驗實例：

1. 稱取約0.1g脾，加入1mL提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，之后按照測定步驟操作，用微量石英比色皿測得計算ΔA測定管=A2測定-A1測定=1.2906-0.4521=0.8385，ΔA空白管=A2空白-A1空白=0.0276-0.026=0.0016，按樣本質(zhì)量計算酶活得：

G6PDH（U/g 質(zhì)量）=643×（ΔA測定-ΔA空白）÷W=643×0.8369÷0.1=5381.267 U/g 質(zhì)量。

1. 取兔血清按照測定步驟操作直接測量，用微量石英比色皿測得計算ΔA測定管=A2測定-A1測定= 0.1528-0.136=0.0168，ΔA空白管= A2空白-A1空白= 0.0276-0.026=0.0016，按液體體積計算酶活得：

G6PDH（U/mL）=643×（ΔA測定-ΔA空白）=643×0.0152=9.7736 U/mL。
相關發(fā)表文獻：

1. Yang Y, Liu W, Li D, et al. Altered glycometabolism in zebrafish exposed to thifluzamide[J]. Chemosphere,

2017, 183: 89-96.

1. Wu S, Wang H, Li Y, et al. Transcription factor YY1 promotes cell proliferation by directly activating the pentose phosphate pathway[J]. Cancer research, 2018, 78(16): 4549-4562.

2. Fan X, Hou T, Jia J, et al. Discrepant dose responses of bisphenol A on oxidative stress and DNA*n in grass carp ovary cells[J]. Chemosphere, 2020, 248: 126110.

參考文獻：

1. Anderson B M, Wise D J, Anderson C D. Azotobacter vinelandii glucose 6-phosphate dehydrogenase properties of NAD-and NADP-linked reactions[J]. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Protein Structure and Molecular Enzymology, 1997, 1340(2): 268-276.

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